客服中心
关注我们
全国服务热线：
18086415513
小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE)ELISA试剂盒实验操作注意事项
发布时间：2021-06-17 11:59:06
小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE)操作注意事项有哪些？,小鼠转化生长因子β2(TGF-β2)ELISA试剂盒,小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒,小鼠粘蛋白2(MUC2)ELISA试剂盒,小鼠乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA试剂盒,小鼠乙酰胆碱(ACH)ELISA试剂盒,小鼠胰高血糖素(GC)ELISA试剂盒,小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
据技术部6月17日11点58分透露：（http://www.spbio.cn/cont/22325.html）
小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 48T / 96T
15 IU/L - 320IU/L
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中乙酰胆碱酯酶（AchE)活性。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE)水平。用纯化的小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙酰胆碱酯酶（AchE)，再与HRP标记的乙酰胆碱酯酶（AchE)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙酰胆碱酯酶（AchE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE)活性浓度。
试剂盒组成
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：640IU/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
320IU/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
160IU/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
80IU/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
40IU/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
20IU/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4、配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍（48T的20倍）稀释后备用
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
操作程序总结：
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期:
1．试剂盒保存：2-8℃
2．有效期：6个月
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批间应分别小于9%和11%
武汉赛培生物，高品质ELISA试剂盒供应商，现货供应，厂家直销，价格实惠，售后完善，提供免费代测服务，含税含运费，（ELISA检测试剂盒价格）欢迎您来电索取。
武汉赛培生物科技有限公司
官网：www.spbio.cn 电话：027-87639600 QQ：16558017
武汉赛培生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业，自主研发抗体、免疫学试剂盒、生化试剂、分子生物学试剂等多用途多属种高品质产品。
自主研发和代理国外一线品牌试剂盒，服务涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。 赛培公司拥有专业人才组成的集研发生产、销售管理和技术服务于一体的核心团队，并与知名高校、研究机构、重点企业等建立战略合作关系。 客服顾问为您解决初期的咨询；销售专员为您选择合适购买方案；技术指导为您处理实验过程中阻碍。全方位服务整个实验，受到了市场的认可与欢迎，赢得了良好的信誉和口碑。
企业理念：诚信为本、品质至上；创新驱动、合作共赢。
相关关键词：人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒,人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒,人谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)ELISA试剂盒,人谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒,人睾酮(T)ELISA试剂盒,人甘油三酯(TG)ELISA试剂盒,人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA试剂盒,人多巴胺(DA)ELISA试剂盒,人端粒酶(TE)ELISA试剂盒,人低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒,人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)ELISA试剂盒,人促卵泡激素(FSH)ELISA试剂盒,人促黄体激素(LH)ELISA试剂盒,人雌二醇(E2)ELISA试剂盒,人成纤维细胞生长因子2(FGF-2)ELISA试剂盒,人成纤维细胞生长因子(FGF)ELISA试剂盒,人补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒,人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒,人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒
